J
2019
Efficient and robust preparation of tyrosine phosphorylated intrinsically disordered proteins
BRÁZDA, Pavel, Ondrej ŠEDO, Karel KUBÍČEK a Richard ŠTEFL
Základní údaje
Originální název
Efficient and robust preparation of tyrosine phosphorylated intrinsically disordered proteins
Autoři
BRÁZDA, Pavel (203 Česká republika, domácí), Ondrej ŠEDO (203 Česká republika, domácí), Karel KUBÍČEK (203 Česká republika, domácí) a Richard ŠTEFL (203 Česká republika, garant, domácí)
Vydání
BioTechniques, UNITED HOUSE, 2 ALBERT PL, LONDON N3 1QB, FUTURE SCI LTD, 2019, 0736-6205
Další údaje
Typ výsledku
Článek v odborném periodiku
Stát vydavatele
Velká Británie a Severní Irsko
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Kód RIV
RIV/00216224:14740/19:00107820
Organizace
Středoevropský technologický institut – Masarykova univerzita – Repozitář
Klíčová slova anglicky
C-terminal domain; co-expression; CTD; IDP; intrinsically disordered proteins; phosphorylation; purification; RNA polymerase II; TRANSCRIPTION TERMINATION; LARGEST SUBUNIT; CELL-CYCLE; KINASE; STRATEGIES; SEMISYNTHESIS
Návaznosti
GA15-17670S, projekt VaV. GA18-11397S, projekt VaV. LQ1601, projekt VaV. 649030, interní kód Repo. CIISB, velká výzkumná infrastruktura.
V originále
Intrinsically disordered proteins (IDPs) are subject to post-translational modifications. This allows the same polypeptide to undertake different interaction networks with different consequences, ranging from regulatory signalling networks to formation of membraneless organelles. We report a robust method for co-expression of modification enzyme and SUMO-tagged IDP with subsequent purification procedure allowing production of modified IDP. The robustness of our protocol is demonstrated on a challenging system, RNA polymerase II C-terminal domain (CM), that is a low-complexity repetitive region with multiple phosphorylation sites. In vitro phosphorylation approaches fail to yield multiple-site phosphorylated CTD, whereas our in vivo protocol allows to rapidly produce near homogeneous phosphorylated CTD at a low cost. These samples can be used in functional and structural studies.
Zobrazeno: 20. 10. 2024 02:18